Masalah biasa apabila homogenizer ultrasonik memecah Escherichia coli

E. coli mengekspresikan protein asing. Apabila sonicated, ia digantung di PBS yang mengandungi 1% triton-X-100. Kesan ultrasonik lebih baik. Kesan 1% triton-X-100 masih jelas. Bekerja, seperti Streptomyces.

Pencincang bakteria terus menambah 1buffer sampel, tambah 5ml mercaptoethanol, campuran, centrifuge, mendidih selama 10min, beban langsung, pewarnaan dan langkah-langkah dekoloring adalah seperti berikut: letakkan gam ke dalam jumlah yang sesuai cecair pencelupan dalam ketuhar gelombang mikro selama 1min, pencelupan larutan digantikan oleh sejumlah besar Air boleh dimasak dalam gelombang mikro selama 10 minit.

Selepas mengekspresikan protein rekombinan, sel-sel telah terganggu oleh gelombang ultrasonik, menggunakan mandi ais, 400W, dan 2S berhenti untuk 1S, tetapi sejumlah besar buih dihasilkan dalam masa yang singkat, yang menjejaskan kecekapan menghancurkan. Kedua pbs dan buffer tris adalah sama, dan akhirnya penghancuran tidak lengkap. Tetapi protein sasaran saya berada dalam sel-sel yang tidak terputus ini, yang membuat saya tidak dapat mendapatkan keputusan percubaan.

Biarkan saya memberikan analisis tentang mengapa keadaan dan penyelesaian ini.

1. Bubbles akan dijana kerana posisi siasatan anda tidak diletakkan dengan baik, siasatan mesti dekat dengan bahagian bawah, kira-kira 1cm (biasanya saya 0.5cm dari bawah), instrumen akan mempunyai tahap kuasa yang berbeza, tetapi anda boleh melihat halaman, terdapat turun naik tetapi jangan terlalu agresif.

2. Super 3S berhenti 10S, ultrasound kira-kira 20 kali untuk melihat kesannya

3. Perhatikan kedudukan tanduk. Sekiranya anda tidak betul, anda harus melaraskannya pada waktunya. Di samping itu, dari perspektif kepekatan bakteria, cuba meningkatkan jumlah apabila menghancurkan, kekuatan tidak boleh melebihi 60%.

4. Cuba 8S untuk Super 8S. Bagi sesetengah protein bakteria, kaedah anda adalah sukar untuk menghilangkan haba, mengakibatkan denaturasi protein dan penjanaan gelembung. Lebih baik berhenti seketika sedikit lagi. Ini lebih umum dalam bentuk badan kemasukan.